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發布日期:2020/11/26 9:22:37
線性PEI溶液的配制方法

線性化聚乙烯亞胺(簡稱:線性PEI)分兩種分子量25K和40K。
兩者
區別:
1)PEI 25K轉染溶液通常需要幾個小時才能制備,PEI 25K含有4-1 1%的殘余丙?;?,可防止聚合物主鏈與DNA強烈結合。
2)PEI MAX 40K完全水解(完全去乙酰化的結構意味著每批產品的表現始終如),可以在兩個小時內轉化為即用型溶液。
3)PEI MAX 40K比PEI25K更易于使用,并且更高效,含更長連續性乙烯亞胺片段,其質子化氮水平比PEI25000提高11%以上。

分下面分別推薦一種簡單適用而高效的方法,講述如何配制濃度為lmg/mL的轉染試劑的配制。

提前準備器材:
1 L玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、pH計、移液器、磁力攪拌棒、帶油管的真空泵
1g的PEI 25K #FSF0001或者1g的PEI MAX 40K#FSF0002、IL純水(Milli-Q@純水,注射用水(WFI),或類似的生物級水)、1N氫氧化鈉、25mL無菌塑料吸管、一次性0.1μm, 0.2um, 0.22μm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

?配制過程:
1g的PEI 25K#FSF0001900mL水溶解攪拌、加熱(60-80°C)加HCl調pH到2.0左右蓋上燒杯,攪拌3h(直至粉末完全溶解)冷卻至室溫加NaOH調pH到6.9-7.1移液到量筒,加水補足至1L真空過濾消毒分裝,-20°C保存。
1g的PEI MAX 40K#FSF0002900mL 水溶解攪拌、加熱(60-80°C)加1N NaOH調pH到6.9-7.1移液到量筒,加水補足至1L真 空過濾消毒分裝, 4° C保存。
注意:加熱或加酸都有助于PEI溶解(特別是配制PEI 25K,只加熱溶解不了,需要適當加酸的),詳細用量可試加一點攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到pH那么低。

轉染液貯存和保存期:
分裝存放在無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶中PEI 25K溶液可在-20°C保存長達一年,部分解凍的溶液可在4°C保存2周,不可反復凍融。
PEI MAX 40K轉染溶液在4° C可保持其性能至少6個月效果最佳,穩定存放此溶液可能適用一年。不可反復凍融。
 
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