產品簡介

間充質干細胞(mesenchymalstem cell，MSC)是中胚層來源的多能干細胞，具有高度自我更新能力和多項分化潛能，體外在一定的條件下可以被誘導分化成脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞。2006年國際細胞治療協會(ISCT)將此三項檢測指標確定為MSC鑒定的必檢項目，以MSC為基礎的研究報道均會對此三項指標進行鑒定。

MSC 被誘導分化成軟骨細胞是一個受多種因素控制的復雜過程，受多種細胞因子和激素的調控。

MSC 能夠分化為成骨細胞，沉積并礦化胞外基質蛋白，這是新生骨路所必需的。分化成骨后會礦化形成鈣結節且有鈣分泌，可以利用茜素紅S(AlizarinRedS)染色檢視分化的成骨細胞。不同的細胞來源(類型、年齡、代數)所得到的分化效果會有差異。

FUSHENBIO®小鼠間充質干細胞成骨誘導分化與染色試劑盒包括成骨誘導培養體系所有成分以及鑒定所用的茜素紅染色液。本產品可用于大鼠骨髓、脂肪、牙髓等組織來源的間充質千細胞的成骨誘導分化與染色。

產品組成

保存及運輸條件：套裝內組分A、D、E需置于2-8℃冰箱保存，保質期為1年；試劑B和C需置于-20℃保存，保質期分別為5年和1年。

特性優勢

誘導分化程序簡單便捷

成骨誘導效率高

質量控制

本產品已經過無菌檢測、 pH 測試、滲透壓檢測、內毒素檢測。

使用說明

成骨誘導分化完全培養基的配制

①.配制前將特級胎牛血清及成骨誘導添加物放置于4℃冰箱內完全融化。

[注意]:融化后的血清中可能出現絮狀物，其主要成分為析出的血纖蛋白，這不會影響產品使用效果;如絮狀物較多，可離心去除(不建議過濾，過濾會造成部分營養物質丟失)。

②.用 75%醫用酒精擦拭消毒試劑盒中各瓶/管表面

③.將血清和成骨誘導添加物全部加入DMEM低糖培養基中

④.輕輕顛倒搖晃配制好的成骨誘導分化完全培養基，使其混合均勻。

特別建議:如短時間內無法使用完全部的培養基，建議按照上述配方比例分批配制;剩余成分可以分裝為合格規格，按各自保存條件儲存，切勿反復凍融。(配好后的完全培養基2-8℃,建議1個月內使用完)

明膠包被培養器皿表面

①.為了避免誘導過程中細胞漂浮，建議對成骨誘導使用的培養器皿表面進行明膠包被;

②.取能覆蓋整個培養血/板底面量的 0.1%明膠入到培養皿/板中，如6孔板中加 2mL/孔;

③.搖勻液體使其覆蓋整個培養皿/板的底面;

④.將鋪有 0.1%明膠的培養皿/板室溫放置(生物安全柜或超凈工作臺中)至少30min 以上;

⑤.吸棄明膠，待培養血/板晾干后，1xPBS洗2次，即可用于接種細胞;

注意:包被明膠的培養皿/板在無菌和明膠不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周.

成骨誘導分化操作規程(以6孔板為例)

①.當MSC融合度達到 80-90%時，消化細胞并計數;

②.將細胞按照 1x10⁵cells/mL 的密度重懸，每孔加入2 mL 在包被 0.1%明膠的六孔板中;

③.將細胞置于 37℃，5%CO2 的培養箱中進行培養;

④.當細胞匯合度達到 60%-70%時，吸棄上清，PBS洗2次，每孔加入2mL小鼠間充質干4細胞成骨誘導分化完全培養基;

⑤.每3天全換液小鼠間充質干細胞成骨誘導分化完全培養基(使用前預熱至37℃;

⑥.誘導 2-4 周后，視細胞的形態變化及生長情況，用茜素紅染液進行染色。

注意:為防止成骨細胞脫落，建議成骨過程中出現大量鈣結節之后，換液形式變為每兩天一次半量換液。

茜素紅染色(以6孔板為例)

①.誘導成骨分化結束后，吸棄上清，PBS 清洗 1-2遍，每孔加入2mL4%多聚甲溶液固定 30 min;

②.將 4%多聚甲醛吸凈，PBS 清洗2遍。每孔中加入1mL茜素紅染液，染色 5-10min; 3.吸凈茜素紅染液，PBS 清洗 2-3 遍。

③.每孔加入 1mLPBS，倒置顯微鏡下觀察成骨染色效果;

④.顯微鏡下可觀察到成骨分化細胞形成大量染成紅色的鈣結節，呈現典型的成骨分化。

圖1:小鼠骨髓間充質干細胞成骨誘導分化茜素紅染色效果

圖2:小鼠脂肪間充質干細胞成骨誘導分化茜素紅染色效果

注意事項

1)、本產品所有組分均為無菌包裝，在使用過程中請注意無菌操作，避免微生物污染;若配制過程有污染風險，可將完全培養基過濾除菌:

2)、本產品發貨時使用冰袋運輸，若收到貨后暫時不使用，請按照保存條件將各組分保存。

3)、為了您的安全和健康，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

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