產品簡介

      菁染料是性能優良的熒光標記染料，摩爾吸光系數在熒光染料中是最高的，其琥珀酰亞胺酯是最常用的脂肪氨基標記試劑，廣泛用于蛋白、抗體、核酸及其他生物分子的標記和檢測。通過改變次甲基鏈的長度, 可改變其熒光發射波長，每增加一個雙鍵，按照Huoffman規則正好紅移約100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成為基因芯片的首選熒光標記物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近紅外區背景非常低，是熒光強度最高、最穩定的長波長染料。特別適合于活體小動物體內成像代替放射性元素。

菁染料琥珀酰亞胺酯（SulfoCy NHS）的標記染料的特點

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之間熒光強度最高，F/P值過高熒光探針會自我淬滅并影響生物分子的生物活性，標記生物分子最好是用單琥珀酰亞胺酯，但是用雙修飾的CyDye NHS并沒有發現交聯。CyDye NHS標記抗體在pH (8.5～9.4)時10分鐘F/P可達5～6，而在pH 7.0幾乎不反應。我們用不同比例的Cy3標記anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗體發現用1:1, 5:1, 10:1 和20:1標記時得到的F/P值分別是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

基本特性

CAS No:146368-16-3

中文名稱:磺基-Cy3-N-羥基琥珀酰胺酯 

英文名稱:Cyanine 3, SE 

別名:2-(3-(1-(6-((2,5-二氧雜吡咯烷-1-基)氧基)-6-氧己基)-3,3-二甲基-5-磺基吲哚-2-亞烷基)丙-1-烯-1-基)-1-乙基-3,3-二甲基-3H-吲哚-1-鎓-5-磺酸  2-(3-(1-(6-((2,5-Dioxopyrrolidin-1-yl)oxy)-6-oxohexyl)-3,3-dimethyl-5-sulfoindolin-2-ylidene)prop-1-en-1-yl)-1-ethyl-3,3-dimethyl-3H-indol-1-ium-5-sulfonate 

分子式:C₃₅H₄₁N₃O₁₀S₂

分子量:727.84 

產品應用及操作步驟

一 .水溶性SulfoCy3 NHS標記anti-GST多克隆抗體

[注意]市場上買到的抗體如果含有其它蛋白（例如serum albumin或gelatin等）或帶氨基的緩沖液會影響標記，在標記前需純化。

1.在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析anti-GST抗體(濃度為0.5 mL at 3 mg/mL)，常溫透析4小時。

2. 在4°C用新鮮的1 L 0.15 M NaCl 溶液再透析過夜。

3. 第二天用1 L 0.1 M NaHCO3(pH 8.3)透析4小時。

4. 用0.22 μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。

5. 用0.1 M NaHCO3稀釋少量的抗體，在280nm處測其紫外吸收值計算標記抗體的總量（IgG antibody摩爾吸光系數170 000 M-1cm-1at 280 nm). 

6. 用無水DMSO配置Cy3 NHS (MW 765.95)溶液濃度為10 mg/mL；計算所需體積以得到想要的CyDye NHS 和抗體的比值(例如20:1)，然后慢慢將其加入到抗體溶液中，同時在暗處常溫緩慢攪拌45分鐘。(無水DMSO)

7. 用1 L 0.15 M NaCl 溶液常溫避光透析4小時除去未標記上的Cy3。

8. 在4°C用新鮮的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析過夜。

9. 用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% 疊氮化鈉溶液常溫避光透析4小時, 在4°C常溫避光再次透析過夜。

10. 用0.22 μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。

11. 用0.01 M PBS/0.01 % 疊氮化鈉整數倍稀釋標記抗體溶液，測量280nm（蛋白）和552nm（Cy）處的紫外可見吸光度。

12. 產品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 疊氮化鈉溶液中，-20℃避光儲存。

F/P計算

SulfoCy3在552nm摩爾吸光系數為150 000 M-1cm-1；此蛋白在280nm的摩爾吸光系數為170 000 M-1cm-1；不同蛋白的摩爾吸光系數不一樣；.Cy3 染料本身在280 nm 的吸收是552nm處的8%。按以下公式計算F/P值。

[Cy3] = A552/150000

[antibody] = {A280- (0.08×A552)}/170000 

F/P final= [Cy3]/[antibody]= {1.13×A552}/ {A280- (0.08×A552)}