產(chǎn)品簡介

      菁染料是性能優(yōu)良的熒光標(biāo)記染料，摩爾吸光系數(shù)在熒光染料中是最高的，其琥珀酰亞胺酯是最常用的脂肪氨基標(biāo)記試劑，廣泛用于蛋白、抗體、核酸及其他生物分子的標(biāo)記和檢測。通過改變次甲基鏈的長度, 可改變其熒光發(fā)射波長，每增加一個雙鍵，按照Huoffman規(guī)則正好紅移約100nm。

菁染料Cy3和Cy5已成為基因芯片的首選熒光標(biāo)記物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近紅外區(qū)背景非常低，是熒光強(qiáng)度最高、最穩(wěn)定的長波長染料。特別適合于活體小動物體內(nèi)成像代替放射性元素。

菁染料琥珀酰亞胺酯（SulfoCy NHS）的標(biāo)記染料的特點

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之間熒光強(qiáng)度最高，F(xiàn)/P值過高熒光探針會自我淬滅并影響生物分子的生物活性，標(biāo)記生物分子最好是用單琥珀酰亞胺酯，但是用雙修飾的CyDye NHS并沒有發(fā)現(xiàn)交聯(lián)。CyDye NHS標(biāo)記抗體在pH (8.5～9.4)時10分鐘F/P可達(dá)5～6，而在pH 7.0幾乎不反應(yīng)。我們用不同比例的Cy3標(biāo)記anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗體發(fā)現(xiàn)用1:1, 5:1, 10:1 和20:1標(biāo)記時得到的F/P值分別是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

基本特性

CAS No:146368-14-1

別名：CY5-NHS酯; CY5 NHS ESTER，Cy5-SE

分子式：C₃₇H₄₃N₃O₁₀S₂

分子量：753.88

溶解性：溶于水；DMSO

EX/EM：646 ～664nm

使用方法推薦（僅供參考）

水溶性Cy5 NHS標(biāo)記 (D-ser2)-leucineenkephalin

Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)

然后加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物過夜。

用HPLC 純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫；從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(對不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動相)

收集適當(dāng)?shù)纳珟Х澹瑯?biāo)記多肽的保留時間比未標(biāo)記的多肽長。

產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲存;必要時可用質(zhì)譜表征。

CyDye標(biāo)記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標(biāo)記的IgG在4 ℃可避光保存2月;更長期的保存需加入等體積的甘油-20 ℃避光保存。

產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% 疊氮化鈉溶液中，-20℃避光儲存。

F/P計算

SulfoCy5 在650 nm 的摩爾吸光系數(shù)為250 000 M-1 cm-1 ，所用蛋白在280 nm處的摩爾吸光系數(shù)為 170000 M-1 cm-1;

SulfoCy5在280nm處的吸收是650nm處的5%。按以下公式計算F/P值。

[Cy5 dye] = (A650)/250 000

[peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170000

F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/ {A280 – (0.05×A650)}