產品簡介

Hoechst 33342，也稱為Bisbenzimide H 33342（雙苯酰亞胺H 33342），是一種A:T特異性的DNA小溝配基，具有細胞膜滲透性，廣泛用于細胞核DNA檢測的熒光染料。與DNA結合后產生非常強烈的藍色熒光，最大激發(fā)波長在350nm左右，最大發(fā)射波長在461nm左右。Hoechst 33342和雙鏈DNA結合后，最大激發(fā)波長為350nm，最大發(fā)射波長為461nm。Hoechst 33342可通過流式細胞分選（FACS）進行基于DNA內容物的活細胞分選，可用來監(jiān)測活細胞的染色質分布，用來檢測BrdU插入細胞情況，通過熒光顯微鏡進行固定細胞觀察，和研究凋亡早期和細胞周期分布情況。除了在熒光方面的功能，Hoechst 33342在細胞類型區(qū)分方面呈現多樣化效應。可用來誘導細胞分化，可逆結合弗蘭德紅白血病細胞，抑制Topo I（拓撲異構酶I）活性，誘導HL-60細胞的凋亡，以及調控連接肌質網細胞的Ca2+外流并影響細胞分化。

本品為Hoechst 33342溶液形式提供，（溶于水1mg/ml)。推薦工作濃度（0.5-10μg/ml）按照10ug/ml算，本品為(100X)濃縮液形式。

產品特性

1）CAS ：23491-52-3

2）英文同義名：2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole trihydrochloride; bisBenzimide H 33342 trihydrochloride; HOE 33342; Hoechst 33342 bisBenzimide;

3）中文同義名：2′-(4-乙基苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5′-二-1H-苯并咪唑三鹽酸鹽；雙苯酰亞胺H 33342三鹽酸鹽；Hoechst 33342雙苯酰亞胺；

4）分子式：C27H28N6O · 3HCl · xH2O

5）分子量：561.93 (anhydrous basis)

6）純度：≥95%

7）外觀：黃綠色粉末

8）溶解性：溶于水（20 mg/ml）

9）Ex/Em：346/460 nm；350/461 nm（Hoechst 33342-DNA）；

保存與運輸方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

運輸：冰袋運輸。

儲存液配制

用雙蒸水溶解，溶解度高達20mg/ml，根據實際情況配制所需濃度的儲存液如5mg/ml。儲存液2-8ºC避光保存，至少1個月有效。【注意】：本品用磷酸鹽緩沖液溶解會出現沉淀。

使用方法

1、工作液配制

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作濃度（0.5-10μg/ml）。

2、固定的細胞或組織染色

對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。Hoechst 33342染色通常在其他染色的最后進行。如果不需要進行其它染色，則直接進行Hoechst 33342染色。

2.1 對于貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=350/461nm。

3、活的細胞或組織染色

3.1 細胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33342染色液，約1/10細胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。對于六孔板，一個孔通常需加入1ml染色液；對于96孔板，一個孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培養(yǎng)細胞10～20min。

3.3 用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

3.4 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。Ex/Em=350/461nm。

注意事項

1）Hoechst 33342對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2）熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3）為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液（Fluoromount-GTM抗熒光淬滅封片劑（水溶性），CAT#:FSM0033-5ML）。 

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。