產品簡介

一氧化氮(NO)廣泛分布于生物體內，分子小，結構簡單，微溶于水，具有脂溶性，可快速透過生物膜擴散，作為細胞間及細胞內的信息物質，發揮信號傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。

本試劑盒采用了經典的 Griess Reagent，并對其測定的溶液體系進行了優化，使檢測下限達到1uM，在 1-100uM 范圍內有非常完美的線性關系。檢測速度極快，完成一條標準曲線或5-10 個樣品的測定只需 3 分鐘。樣品范圍廣，可以檢測細胞或組織及其培養液中的一氧化氮的含量，酚紅和10%血清均對測定無明顯干擾，也可以檢測血清、血漿和尿液中一氧化氮的含量。                       

產品組成

保存及運輸條件： -20℃避光保存，一年有效。4℃避光保存，半年有效。冰袋運輸

使用方法

建議正式實驗前，選取 2 個樣本做預測定，了解實驗樣品情況，熟悉流程，避免樣本和試劑浪費。

一、樣本準備：

1. 細胞/組織樣本：

a. 取適量細胞或組織，快速凍融裂解，或使用 Western 及 IP 細胞裂解液（無需添加抑制劑）裂解；

b. 8000 g，4℃離心 10min，取上清，置于冰上待測，體積不足 50μL，加入重蒸水或0.9%NaCl稀釋（相應地標準品也需用重蒸水或 0.9% NaCl 稀釋）。

2. 液體樣本：若渾濁，先離心取上清液體檢測；若是澄清液體，直接檢測即可。

二、樣品測定：

1. 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 540nm。如無 540nm 濾光片，520-560nm的濾光片也可。

2. 取出 Griess Reagent I、Griess Reagent II 試劑，恢復至室溫。

3. 在 96 孔板中依次加入：

三、標準曲線制作：

1. 標準品工作液配制：

(a) 取 10μL 標準品（1M），加入到含有 990μL 稀釋液的離心管中，充分混勻，此時標記混合液體為 A，濃度 10mM；

(b) 取 A 液 10μL，加入到另一含有 990μL 稀釋液的離心管中，此時標記混合液體為B，濃度100μM；(c) 用稀釋液再將 B 液稀釋成不同濃度梯度的標準品工作液：0, 1, 2, 5, 10,20,40,60,100μM（濃度梯度可以自行設置）。

[注]：用待測樣品所用溶液稀釋標準品(1-100µM)：例如樣品為細胞培養液上清，細胞培養液為DMEM＋10%FBS，則用 DMEM＋10%FBS 稀釋標準品。

2. 按照樣品測定的加樣順序操作，繪制標準曲線，根據標準品曲線計算出樣品中一氧化氮的濃度。標準曲線示例參見圖 1，供參考。實際測定時，由于反應條件、試劑盒批次的不同等因素，會導致檢測結果與示例數據存在一定差異。

注意事項

1).本產品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

2).如保存不當導致溶液變色或沉淀，則說明該溶液已經失效，請購買新的試劑盒。

3).不建議使用 RIPA 裂解液對細胞或者組織進行裂解，使用 RIPA 裂解液可能在后續反應中產生沉淀，影響測試。

4).對于血清樣品中 NO 含量的測定，粗略地計算，可以直接用水稀釋標準品，從而計算出血清樣品中 NO 的濃度。比較精確地計算，如果測定的正常血清是常見血清可以從文獻上查到其中NO 的濃度，然后用該已知 NO 濃度的血清稀釋標準品，這樣就可以得到比較精確的NO濃度。或者使用已知濃度的人或其它動物的血清稀釋標準品也同樣可以達到目的。或者參照類似文獻進行血清中 NO 濃度的測定。

5).本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

6).為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。